1.摇管上的高密度接种工艺，2.从稳定细胞池中筛选出一个单克隆，不需要做克隆源性以及稳定性，所以可以做的比较快，比较快的拿到细胞株

确认补料比例稍低，且摇床的转速不够导致的；乳酸太高导致渗透压到了480mOsm/kg附近，高渗透压导致了细胞直径变大 CHO细胞本身正常状态下活率应该在99%以上，90%活率虽然看着很高，但是已经不是细胞的正常状态了，Fed-Batch后期活率骤降是很正常的。

乳酸产生有3个： 1. 细胞株本身乳酸代谢异常，可以通过更换宿主细胞株或者提高筛选克隆通量，且在克隆筛选时将代谢参数也纳入筛选标准； 2. Fed-batch时葡萄糖浓度维持在高水平，8-10g/L以上，建议采用低糖工艺，可以每天补料补糖，降低糖的上限浓度； 3. 细胞株消耗氧能力高，因此摇瓶摇管无法提供足够的溶氧，可以提高摇床转速或者使用反应器。

1.乳酸累积导致的pH下降；2.补料补糖不足；3.瞬转试剂对于细胞有损伤

不能一概而论，酸峰来源的修饰不同。补料影响氧化还原环境，进而影响酸碱峰，大部分可以通过调节补料来调节；但基础培养基提供大环境，比如C端Lys切除导致的酸峰，调节基础更好；基础与补料交互影响。

温度和光照对培养基补料颜色影响较大，我们做过性能稳定性考察，避光室温放置9d、13d或未避光均出现不同程度颜色变化，但是细胞活率及蛋白产量没有显著性差异

不需要，稳转项目可以使用线性化，瞬转项目中质粒是否线性化，超螺旋比例不影响最后表达结果

从高表达类型来看，293优于CHO，从低表达类型来看，CHO的长期活率维持以及密度都会更高，会有部分优势，某些难以表达的抗原，可以采用其他表达体系。

β补料为碱性成分，培养基中的二价金属离子碱性环境下会沉淀，部分为黑色，含量少，不影响生长

man5调控困难的地方在于其他项目上或者文章中报道的数据并不能拿来直接使用。pH，渗透压，温度以及MnCl2添加剂即便是相同的条件这些因素在不同项目上都是有可能出现Man5变化相反的趋势。这其中以MnCl2最为明显，不同浓度的影响完全是不同的。您那边如果有man5调控需求的，得结合这些参数设计一个DoE实验。所以最理想的情况是通过最初的培养基筛选，就直接筛选到自己man5目标范围内的培养基，后续调控要省力很多。