细胞形态异常,需要综合关注细胞代次、传代操作、培养基和血清等诸多因素。传代次数过多会导致细胞生长状态明显变差,传代过晚也会因接触抑制造成这一现象。且细胞对血清具有一定适应性,在使用某个批次血清进行连续传代培养后,更换新批次血清时,会因两批血清中各类物质含量的差异导致细胞生长状态受到影响。但只要细胞可以增殖,这些情况都是有机会调整好的。与此同时也要关注基础培养基和传代操作等方面是否存在一定影响。值得关注的是,不同批次血清可能对特定细胞匹配性不同,因此推荐采购前进行试用。
依科赛血清生产工艺采用国际最先进的三级0.1μM过滤工艺,分装环节拥有超洁净分装环境以确保无菌,质检方面均经过原产地和国内的双重质检,保证每个批次血清的细菌、真菌和支原体等微生物检测均为阴性,因此依科赛血清在生产、分装和质检等各个环节都严格避免了微生物污染的发生,不会出现血清本身存在微生物污染的情况,依科赛血清的优异品质会为您的细胞培养实验保驾护航。 细胞培养过程中的微生物污染一般多见于操作阶段,例如操作过程中没有严格区分无菌区域和非无菌区域、分装血清冻存时因体积过大顶开盖子、冻存管在融化后打开前没有在管盖周围进行充分消毒等,都会引起微生物污染,因此在血清使用过程中应重视全程无菌操作。如需排查血清是否存在污染,可取少量血清进行无菌检测。 确定血清存在微生物污染后可尝试使用5-10倍浓度的青链霉素双抗冲击培养24-48h;真菌污染的细胞无法抢救,应立即将细胞瓶进行高压灭菌处理,并彻底消毒培养箱;支原体污染可考虑更换早期代次细胞,或使用商品化支原体去除试剂。
细胞培养过程中在细胞内或细胞间出现黑点状物质属于常见现象。如细胞传代多次后出现黑点,很可能是细胞状态不佳的表现,需要考虑传代次数是否过多或传代操作方法是否需要改进。一些种类的细胞在正常状态下也会存在黑点状代谢产物,此类情况需注意判断。当发现黑点时,首先要肉眼观察培养基是否浑浊,并镜下观察细胞生长状态及黑点是否游动。如果细胞存在微生物污染,如细菌污染、支原体污染等,微生物会大量繁殖,培养基会迅速变黄且浑浊。如果镜下观察细胞生长状态良好,与黑点出现前相比没有任何变化,那么黑点的出现可能与以下几种情况有关:1.细胞生长过老,黑点为破碎细胞残骸;2.配制培养基PH值偏高,不宜细胞生长;3.培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代后可消除;4.血清等级不足以维持细胞良好生长状态。 所谓“黑胶虫”是否为一种生物,目前尚有争议。由于没有明确的分离和鉴定报告,目前学术界主流观点认为这是细胞培养过程中的代谢产物,或是某些微生物污染造成的现象。如果怀疑有“黑胶虫”污染,请注意排查培养细胞是否存在微生物污染物。
新鲜培养基中添加血清和抗生素后,建议您应在2周内使用完。
热灭活对大多数细胞而言是不需要的。实验表明,热灭活后的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用,甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分,从而影响血清质量,造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长,都会造成血清品质下降。且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀的概率,这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是“小黑点”,通常会让研究者误以为是血清遭受污染。因此,若非必须,血清是不需要做热灭活的,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。 热灭活前必须先摇匀解冻血清并恢复至室温 ,1.取部分摇匀血清至于用50ml离心管中,并准备同规格对照管一个;2.对照管内放入与血清等体积的水。3.对照管内插入温度计进行温度预试,当温度达到 56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min; 4.灭活过程中需要经常轻轻晃动摇匀,如每隔 5min,以保证温度均一。
走私血清缺少检验检疫监管,冷链运输无法保障,严重影响血清批内和批间稳定性,实验数据结果不可控。正规血清来源于中华人民共和国海关总署允许进口的非疫区国家,而很多走私血清往往来自发生过疫情的国家,未经检疫的血液制品中可能携带传染性物质,一旦流入境内,可能会对试者和研究人员的生命健康造成威胁,因此选用正规进口血清十分必要。依科赛进口血清均来自中国海关允许进口的非疫区国家,并于当地精选2年内无任何疫病发生的牛场,采血、生产、质控和运输等所有环节均有严格把控,并可以提供正规进口的所有相关资质。依科赛的每一批血清均为“正宗血源、正规进口”。
1.根据细胞类型以及下游实验需求的不同,试用周期一般在1-3周左右; 2.梯度替换:原则上以原有血清为主,逐渐增加新血清比例,最终将原有血清全部替换,老、新血清过渡比例一般为 3:1、1:3、100%新血清 ;3.血清试用过程中主要观察的指标为:细胞增长率、细胞形态、细胞存活率、下游实验效果等,各指标标准可参考原有血清培养的数据。
对于某些细胞而言血清并非越贵就越好。测试前首先要考虑原有血清的品牌、血源地和品级等情况,选择替换时要选取各项条件均最接近的批号进行测试。
一般细胞如果不适应新更换的血清,会在更换血清的初期就表现异常。如测试顺利并已换用新血清之后出现问题,请检查测试是否覆盖了实验室的所有细胞,或考虑是否为血清外的其他因素引起了细胞生长状态异常。
我们依科赛不是血清的搬运工,首先我们在乌拉圭和澳洲都有自己的血清工厂,并且23年的六七月份,我们乌拉圭的二期工厂也会投入生产。