CA01 α:进行Fed-Batch培养时,每次补料体积建议为初始培养体积的3-6%,如果培养体积过小,如TPP管或者125mL摇瓶,建议根据补料当天的实际培养体积计算补料量;如果培养过程中有大量的、重复性取样,也需要考虑精确计算当天补料量; CA01 β:每次补料体积为CHO补料培养基CA01α的10%
接种密度6~10×105 cells/mL;培养转速:120~140 rpm; 培养温度:37 ℃/降温建议30-33℃,需要客户根据自身项目,确定最适宜的降温策略; 培养湿度:40~80%; 建议培养体积:15mL/50mL TPP管,30 mL/125mL Flask,60mL/250mL Flask;
培养基配制相对简单,较易溶解,溶解时间可控制在1小时之内,pH需要调节酸碱,终pH范围在7.10左右
培养基包含磷酸缓冲体系、碳酸氢钠缓冲体系和HEPES缓冲体系,缓冲范围在pH6.5~7.5。 但由于细胞代谢产物累积,可根据工艺需要通过酸碱调节剂进行pH控制。
浊度只作为中控指标(放行标准是1.0以内,实际比该值低),渗透压范围是280-320mOsm/kg。
检测项目和COA可由QC部门提供。 粉体:包括外观性状、pH值、渗透压、含水量、微生物限度 、生物学效能; 液体:包括外观性状、pH值、渗透压、内毒素、无菌、生物学效能;
经过内部测试,我们的补料培养基配制成液体后,在室温放置15天或者30天,不会出现性能下降。
基础/补料液体培养基稳定性,一般不会有析出、沉淀、变色氧化等,但不建议放在室温,在室温条件下,做过30天的稳定性测试,性能上未有变化。所以短时间内放置室温应该没有问题。
CE01、补料培养基CA01α和CA01β低温冷冻96h或者低温冷冻96小时并反复冻融3次,并不会影响产品的使用性能,更长冷冻时间,暂未数据。 一般情况,还是需要避免出现培养基冷冻或者反复冻融的情况出现。
配制成液体培养基后,其通透性或者说浊度表现是不如传统基础培养基的,整体浊度会略微偏高,属于正常的高浓度浓缩液表现 进行渗透压测试时,需要稀释5倍