根据USP药典法规要求，HCP的检测回收率要求在 70-130% （在定量限附近的回收率可接受范围 50-150%）。

对于商业化试剂盒企业一般需要验证试剂盒的系统适用性和对自己样本的适用性。

建议优先通过不同试剂盒或经验证的前处理对样本残留在LLOQ以上进行准确报告，其次可以考虑，在最小稀释倍数（MRD）条件下，将检测结果报告为：<定量下限*（MRD）稀释倍数。

任何一个报告值都必须建立在准确度合格的前提下，如果样本稀释线性、加标回收率不合格，那么可能存在样本基质干扰，因此所谓低于LLOQ的报告就不够准确，无法简单地据此进行残留水平报告。

目前主要可参考的依据是USP<1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals中，3.2.3 GENERATION AND QUALIFICATION OF REPLACEMENT REAGENTS，一节描述抗原抗体如果发生变更，建议对新旧抗原，抗体进行头对头比较，确认校准品蛋白含量，抗体检测性能，覆盖率进行比较，除此之外，建议对现有产品的工艺上下游节点，从收获到原液DS，进行检测比较，确认新试剂盒能检出相似，或更高的杂质去除率；此外，3.3 Immunoassay Method Development and Qualifying as Fit for Use，描述了平台型方法适用考量建议。1. 模拟小量空细胞发酵获得宿主蛋白，如：CCF，检测在相似浓度条件下，与平台方法中校准曲线的相似性；2. 利用2D等方法比较CCF与试剂盒中校准品的相似度；3. 比较实际工艺收获液，原方法和平台型方法检测报告水平。一般认为，报告值差异在2倍以内，可评价为相似，可替换；4. 有条件情况下，利用相似总蛋白定量方法，以及药物蛋白含量可定量前提下，对实际工艺中，收获CCF的HCP进行扣减计算，评价试剂盒检出报告与扣减结果在2倍以内，也可以认为相似，可替换；但是实际情况中，往往头对头比较抗体，抗原难以实现（自行定制化开发的可行），所以大概实际能参考的就是1. 比较工艺上下游，检测杂质去除率，相似或更高-可替代；2. 比较实际收获液，检测报告水平相似水平，2倍以内-可以替换；

CHO HCP检测试剂盒三步法没有要求，但是一步法操作建议先加样本再加检测抗体，反过来容易导致本底OD值偏高，影响线性拟合及浓度回算

接近下限的样本浓度检测误差更大，一般CV%可以达到25%，数据中基本上满足2倍左右的差距，在操作上更精细一些

1.裂解液不同：质粒生产常用NaOH-SDS；重组蛋白采用尿素或者是超声等全裂解形式；2.裂解目的不同：质粒生产中裂解液是为了中和及沉淀蛋白质；重组蛋白工艺为了充分溶解包涵体等蛋白组分；3.收获液组分不同：质粒样本以及残留的耐碱HCPs；重组蛋白工艺中包含目的蛋白、HCPs、杂质等；

1.准确性高：DNA校准品有完整的溯源链，溯源到国家标准品，且校准品为即用型状态，简化操作步骤的同时减少由于稀释误差导致的标曲异常 2.专属性好：特异性检测相应宿主细胞的残留DNA，不受其他外源细胞干扰。 3.精密度高：批内重复性高，批间差异小。 4.防干扰：UNG防污染系统，有效去除PCR产物残留污染；添加内部控制（IC），提高对样本干扰、反应配制的检测控制。

在初次使用时建议您进行系统适用性和样本适用性的研究。系统适用性主要包含线性范围、空白限、定量限和重复性的验证；样本适用性需要验证空白基质干扰、样本稀释线性、样本/空白加标回收率、重复性和选择性。通过以上研究以确认用户端平台、仪器、操作等是否与试剂盒相匹配，以及待检测样本是否存在干扰，使检测报告值更加准确。