苏州依科赛生物科技股份有限公司

Q

变性过程会不会把ProteinA也一起变性了，需要了解哪些关键要点？

A

Protein A是耐热的，加热煮沸不影响Protein A活性。
Q

关于Protein A残留检测试剂盒，转移前处理后的样品时，需不需把上清转移至新的EP管中混匀后再上样。如果不需要，那离心会不会造成上清中ProteinA分布不均一导致结果不准确，如果需要，那是不是全部上清转移，转移不完全会不会造成损失？

A

长时间无法上样，需要将含有Protein A的上清液至新的离心管中，对于样品的预处理，说明书中样品预处理部分有详细操作步骤；建议验证后建立SOP，避免回收率不稳定情况；
Q

Protein A残留检测试剂盒检测双波长时，还需要扣除空白么?

A

不需要。
Q

Protein A残留检测试剂盒单波长检测需要扣除空白，那和双波长检测的结果差别大么?

A

单波长检测时，进行曲线拟合时，将0孔作为错定点，所得结果与双波长差别不大。
Q

我们的样品基质pH值5.0左右，这个需要进行对样品调pH么? 调pH具体怎么操作，因为调pH后，浓度和体系都变化了，那我怎么转换成我们实际样品的残留量?

A

由于ELISA采用抗体抗体结合的检测原理，因此过酸过碱都会影响报告结果，建议检测前，对样本pH值进行检查，如果pH值在6.5-8.0之外，建议报告前进行适当中和 (根据调PH值后的体积与调整前的体积，得到一个比例系数，最后计算时乘上比例系数); 如果经过适当稀释，可以满足样品准确度要求，也可通过样本稀释方式降低样本pH对检查的干扰。
Q

标准品前处理完离心后，也会发现很多沉淀，这是为什么，有哪些操作要点？

A

标准品稀释液中含有一定量的BSA，加热后BSA会变性沉淀。
Q

Protein A残留检测对样品蛋白浓度有哪些要求？

A

进行ProteinA检测的时候需要将样本蛋白浓度稀释到0.1~1mg/mL，蛋白浓度会影响试剂盒反应
Q

Protein A残留检测试剂盒在性能验证中如何实现数据的全面性以及CDE认可度有哪些关键要点？

A

验证内容包括标曲线性、试剂盒检测上下限、准确度确认，根据样本基质的特殊性完成相关的性能确认；建议多浓度样本的检测确认，相对保险；不同配基的分子量以及序列特殊性确认，目前大多数以GE的配基为主
Q

支原体快速检查产品覆盖哪些种属，需要了解哪些关键要点？

A

覆盖柔膜菌纲共202种支原体
Q

药典针对补充方法和替代方法的验证要求有什么不同，具体要求和判断方式是什么？

A

补充官方方法需要验证：特异性、检测限、耐用性；替代官方方法需要验证：特异性、检测限、耐用性、可比性研究（药典同期验证）；