按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

请按照试剂盒说明书上的介绍稀释标准品并检测，标曲的拟合可以用Excel，添加散点图并用多项式拟合。我们推荐使用专业软件和四参数方法拟合，更为准确。判读标准主要是看标曲的线性，其中R2要达到0.99%以上。

ELISA检测实验中的标准曲线必须做；如果不做标曲只做样品检测，则既不能判断结果是否成立，又无法计算样品数值；每次检测必须单独做标准品检测并拟合标曲，之前的标曲即使是同一试剂盒的也不能使用；

柱子需要充分56℃干燥——彻底干燥去除乙醇，对下游酶促反应很关键；样品杂质过多——实验前将样品于16,000×g离心10分钟，取离心后的上清样本，把样品中多余的杂质去除。

样品保存不当——血液样品发生溶血，减少样品用量；样品杂质过多——实验前将样品于16,000×g离心10分钟，取离心后的上清样本，把样品中多余的杂质去除；Proteinase K 活性下降——重新制备Proteinase K，使用后Proteinase K 必须保存于-20℃，Proteinase K 与Buffer ACL 不能预先混合；样品裂解不充分——样品与Buffer ACL 混匀不充分，重新提取，加入Buffer ACL 后先颠倒混匀3~5次，然后以最高速度涡旋让样。

①走私血清缺乏检验检疫监管，冷链运输无法保障，严重影响血清批内和批间稳定性，实验数据结果不可控；②正规的血清来源于中华人民共和国海关总署允许进口的非疫区国家，而很多走私的血清往往来自发生过疫情的国家。未经检疫的血液制品中可能携带传染性物质，一旦流入境内，可能会对试者和研究人员的生命健康造成威胁。

FBS中的絮状物可能由很多种原因造成，其中最常见的沉淀主要成分是纤维蛋白和脂蛋白，不会影响血清品质，沉淀若需去除，视沉淀大小500-1000×g，离心5-10min去除，也可不做处理。

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否浑浊，然后在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变浑浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：①细胞生长过老，破碎的细胞残骸；②配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；③培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除；④血清等级不足以维持细胞良好的生长。