一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否浑浊,然后在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变浑浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:①细胞生长过老,破碎的细胞残骸;②配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;③培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除;④血清等级不足以维持细胞良好的生长。
请先确认细胞培养实验方案是否需要对血清进行热灭活。一般不建议热灭活,热灭活处理会损失血清中部分营养成分,并且容易发生蛋白质聚集沉淀;少数对补体敏感的实验需要(如某些免疫学实验,腺病毒包装,某些PS培养等),可酌情使用热灭活血清。热灭活方法:血清完全解冻充分摇匀后置于56℃水浴中30min,期间不时晃动均匀。
实验显示,热灭活对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清,会增加沉淀产生的概率,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染。热灭活过程中局部温度过高,摇晃不均匀,灭活时间过长,都会造成血清品质下降。若非必须,可以不需要做热灭活这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
血清中含有微量的血红蛋白,与采集血液过程中血细胞的破裂数目有关,只要血红蛋白的含量在药典规定范围内,颜色的深浅和血清品质无关,不影响细胞培养。中国药典规定血红蛋白含量≤200mg/L。
所有的ExCell Bio血清都在冰冻状态下由干冰运输,因此您收到时应该仍是冰冻状态。如果只是部分解冻,FBS仍然可以使用,但是建议先将FBS在冰箱中充分解冻,之后温和的摇晃摇匀,再移至-10℃及以下进行储存。
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在2周内使用它。
建议血清应保存在-10℃及以下。若一次无法用完一瓶,无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。解冻时,建议将血清从冷冻室先移至2-8℃冰箱解冻,再放置于室温进行彻底解冻。请注意,解冻过程中需要经常摇晃混合。严禁将FBS在37℃长时时间孵育解冻。