明确是不含有细胞周期阻断成分的，比如丁酸钠，VPA（丙戊酸钠）之类的

不可以培养贴壁的293细胞，只能进行无血清悬浮驯化成悬浮293细胞，贴壁293 的病毒生产可以推进病毒生产无血清培养基（换液培养基），降低下游纯化压力

正在从复苏密度，培养基种类，筛选压力，摇床转速，抗剪切添加物等方面协同客户排查原因

293瞬转中添加的葡萄糖为3g/L，所以推荐客户配制300g/kg的葡萄糖溶液，每次添加培养体积的1%即可； 关于高浓度的葡萄糖配制时，不要用热水，会有一定的碳化现象，配置时，使用磁力搅拌器，一点点加入，溶解后再继续添加，配置完，使用0.22um滤器过滤除菌。不要用高压灭菌，会碳化。配置全程注意烧杯以及水的内毒控制。

HE01中含有EDTA，如果客户的蛋白是His标签，镍柱纯化，就会冲柱，影响收率

补料可以隔天补料，每次5%，葡萄糖就根据体系内葡萄糖浓度，补齐到6g/L，这个A1补料糖浓度为65g/L，计算的时候需要减去

除去葡萄糖后，大约是80g/L；渗透压稀释5倍后为260 mOsm/kg

主要是双组分的pH区别以及氨基酸的溶解度情况引起，调整PH后会恢复正常

HE01培养基需要额外添加终浓度为 6mM 的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺易降解，可每次使用培养基时加入谷氨酰胺，或者分装部分培养基添加谷氨酰胺后一周内使用。 如客户不想要额外添加，有HE01 plus定制培养基可以测试。 HE02以及HE03不需要额外添加，已含类似物。

1)需要在培养过程中额外添加终浓度为6 mM的谷氨酰胺；加入谷氨酰胺（Gln）后需一周内使用； 2)不可反复放置于37℃预热。如需37℃预热，可于每次使用前分出所需体积，放于37℃预热，剩余体积及时放回2-8℃冰箱保存； 3)如果细胞原来在其他品牌培养基里培养，可直接用本培养基产品传代培养，传代 3 次（9-10 天）后细胞可适应本培养基产品，活率、细胞密度稳定，可进行后续实验。 4)如果原悬浮293细胞是用其他品牌培养基培养后冻存的，请用冻存时使用的细胞培养基来复苏细胞，传一代后换成本培养基产品，再传代 3 次、细胞状态稳定，可进行后续实验。使用本培养基产品培养后冻存的细胞，则可以使用本培养基产品复苏 5）在驯化过程中出现大量结团现象，可以通过低速离心的方式去除较大的细胞团；若细胞团持续出现，需要在传代中加入一定的抗结团试剂，成功驯化后再去除 6）若出现活率降低的现象，可使培养环境便温和，如降低转速