含有人血白蛋白,为确保材料安全性,所使用的原材料为临床级产品,是国家批准的可用于临床诊断的产品,有明确的来源、批号及质量报告,经过艾滋病病毒(HIV-1/2)抗体、乙肝表面抗原(HBsAg)抗体和丙肝病毒(HCV)检测,检测结果为阴性。
细胞在超低温状态下生理活动基本处于静止状态,复苏后细胞恢复活性需要一个过程,因此复苏细胞首次传代时间延长。
温和消化酶是重组蛋白酶,不含有动物源成分,作用更温和,消化时间稍长一些,消化MSC细胞37℃环境下,通常需要2-6min。
不可以。残留的消化酶会影响传代后的细胞贴壁,进而影响细胞增殖;消化后加入等体积培养基稀释消化液,再离心收集细胞;离心去除消化液再用PBS清洗细胞效果更佳;尤其是原代培养中首次传代时(P0 到 P1)
不需要。建议复苏细胞直接使用依科赛产品,尽量避免体系转换。
植块法原代分离,如果使用MH01,需添加2倍添加组分,
完全培养基在室温平衡后使用,2周内用完;37℃预热仅限单次使用
1)QPCR法:使用根据慢病毒DNA设计的引物,用慢病毒裂解物为底物进行QPCR分析,根据标准曲线确定慢病毒滴度。 优点:定量、精确; 缺点:非活性计数。 2)稀释法:使用稀释的表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞,尽量使1个细胞只接受1个慢病毒感染,72小时后根据荧光细胞数量计算慢病毒滴度。 优点:计算慢病毒活性;缺点:只能用于表达荧光蛋白的慢病毒。 3)流式分析检测:使用表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞,使用流式细胞仪分析荧光细胞比例。 优点:快捷方便;缺点:无法定量。
1)培养基保存,尽量减少培养基与空气接触,若开瓶后的培养基短时间内不能能用完,可以按试验安排进行分装 2)细胞需要提前一天以稀释的方式接种,培养24h后进行转染 3)转染前不可对细胞进行离心换液,也尽量避免新鲜培养基的加入
-40°保存最好,-20°也可以。