可以在种板后倒扣培养板，倒扣可以更好地使基质胶形成穹顶状凝胶，且倒扣细胞培养板可以较好地避免细胞因重力或其他因素沉底产生贴壁现象。操作时应当注意翻转过程，不可用力过猛。

基质胶体积的用量需要根据实验孔数决定，建议基质胶与细胞混合后占比不少于70% ，我们提供细胞-基质胶悬液的推荐种板体积，您可以根据我们提供的数据进行计算，建议种板时适当扩大胶滴直径。 推荐穹顶种板体积： 96孔板：3-8uL 48孔板：12-20uL 24孔板：20-30uL

不是的，培养类器官时需要观察类器官的尺寸，并通过传代等方式进行控制。这主要是由于类器官内部缺乏循环系统造成的。当类器官的尺寸较大时，靠近中心的细胞难以和外界进行氧气和营养成分的交换，易凋亡，不利于后续的检测。

一般情况下，建议使用裸鼠（BALB/c-nu/nu），BALB/c-nu/nu没有胸腺等免疫器官，对肿瘤细胞没有免疫作用，易于成瘤。

肿瘤块先缩小，后变大是比较常见的，可能是炎症反应造成的。一方面，基质胶在早期将肿瘤固定在皮下后，由于注射量极少，小鼠首先会吸收基质胶，之后可能有一部分肿瘤细胞被小鼠自身吸收，您可以继续观察2周。另一方面，您还需要考虑细胞本身成瘤性、细胞活力以及细胞注射量等因素，如果可能是这方面原因造成的，需要再次进行验证。

是的，多点位皮下注射的肿瘤可能会相互影响。

并非所有的肿瘤都能够有均一形态规则，肿瘤体积差距很大可能与小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议使用周龄较小的裸鼠，细胞接种时对细胞悬液进行充分重悬。

您可以在实验前一天使用无血清培养基饥饿细胞，第二天成管效果会更好，也要注意细胞的密度

成管时间主要取决于培养基中血管生成因子的浓度，ECM完全培养基或肿瘤条件培养基中血管生成因子较丰富，容易成管，我们推荐使用这类培养基进行操作。

成管时间与细胞状态密切相关。细胞状态好时，2-3小时开始成管，细胞状态较差时，可能18-24h成管；如果使用原代内皮细胞而非永生化细胞，开始成管的时间会延迟几个小时。我们建议您首次实验时，每4个小时观察一次。