1、移液精确度差。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、仪器相关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。

1、Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1，提示反应体系有污染。应根据NTC阴性对照的融解曲线确认污染源(文库污染或DNA Standards污染) 。 2、Ct (DNA Standard 2) - Ct (DNA Standard 1) < 3.1，提示基线(Baseline)设置不当。手动调整基线(Baseline)为1-3。 3、DNA Standards之间的ΔCt > 3.6，提示扩增效率差。确认所有试剂在使用前都已充分解冻并彻底混匀；确认所有组分浓度正确以及反应程序无误；确认每三个复孔的数据Ct≤0.2，否则去掉。 4、长时间强光照射会导致2×SYBR qPCR Master Mix荧光值下降，进而造成ΔCt > 3.6。应按照推荐方式避光贮存试剂。

1、受污染影响的标准品的Ct值未舍弃。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、仪器相关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。 4、移液精确度差。

1、如Ct (NTC) - Ct (DNA Standard 6) < 3或者Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1，且计算扩增效率超过100%，提示反应体系有污染。应根据NTC阴性对照的融解曲线确认污染源(文库污染或DNA Standards污染)。绘制标准曲线时，应先根据Ct (NTC)确定标准曲线有效Ct值范围，舍弃受污染影响的Ct，使用剩余的Ct 绘制。 2、不恰当的基线(Baseline)设置会增大Ct (DNA Standard 1)，进而影响扩增效率计算。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 3、移液精确度差。

1、不恰当的基线(Baseline)设置会增大Ct (DNA Standard 1)。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 2、仪器相关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。

可能原因： 1、若样本需要稀释检测的比例很大，例如1:100，建议客户先1:10再1:10稀释。切勿直接在1μl的样本加入到99μl的试剂稀释液中。 2、将液体加入到孔中时每次的操作手法要一致。

来自于正常个体的血清或血浆建议按照说明书提示稀释，若有非正常个体样本，为了结果的有效性以及降低实验风险程度建议客户做预实验决定样本的稀释倍数。

正常的TMB应该是无色，若发现TMB变成微蓝色，请弃用。

可能原因： 1、若客户买的试剂盒品种≥2时需要确认未使用错板条。我们试剂盒内的酶标板都画有颜色，客户可根据颜色区别不同的品种。 2、漏加生物素化的抗体工作液或酶结合物工作液。

可能原因： 1、溶解标准品以及配置生物素标记抗体、浓缩酶结合物时需要采用试剂盒内的试剂稀释液，若采用双蒸水可导致蛋白失活。 2、若标准品是粉末状，需加入稀释液之后防止至少15min之后才能使用。 3、严格根据说明书中的温度进行实验，实验过程中需要用微量振荡器的步骤必须使用。 4、严格按照试剂盒建议的波长的读板。 5、洗板时间不宜过长。