1）支持 PEI、脂质体等转染试剂，质粒、转染试剂的稀释推荐用Opti-MEM 培养基（GIBCO 品牌）或无菌 PBS或150mM的氯化钠溶液。混合后的转染试剂和质粒加入到293培养体系中，体积占比一般不会超过10%。 2）影响转染的因素：转染试剂来源、效能；质粒的设计质粒的质量转染试剂与质粒的质量比；细胞密度；转染工艺增强剂；细胞密度；转染工艺；增强剂；收取病毒的时间 3）选择活率高、指数期的细胞 4) 转染前，细胞需要提前接种并培养一天，根据平时细胞生长速率控制好接种密度，尽量避免在转染前再通过离心或稀释的方法调整密度

1）QPCR法：使用根据慢病毒DNA设计的引物，用慢病毒裂解物为底物进行QPCR分析，根据标准曲线确定慢病毒滴度。 优点：定量、精确； 缺点：非活性计数。 2）稀释法：使用稀释的表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞，尽量使1个细胞只接受1个慢病毒感染，72小时后根据荧光细胞数量计算慢病毒滴度。 优点：计算慢病毒活性；缺点：只能用于表达荧光蛋白的慢病毒。 3）流式分析检测：使用表达荧光蛋白的慢病毒感染细胞，使用流式细胞仪分析荧光细胞比例。 优点：快捷方便；缺点：无法定量。

主要看中间品是用于单批次生产还是多批次生产，多批次的需要进行货号申请以及效期管理，单批次的不需要。

从物理外观，细胞测试，有机杂质，溶解度，滤过性，微量元素杂质等方面进行3批次评估，另外在物料替换的节点也会做多种细胞的生物学效能验证。 T/NK/MSC等原代细胞对于毒性杂质比较敏感，CHO细胞则不敏感，因此对CHO培养基会进行蛋白产物质量参数的评估。

不存在不一致的情况，因为每个物料依科赛都单独有一套物料标准，满足了标准才能进入到合格供应商体系内。使用进口/物料生产的产品性能是一致的，没有区别。一家公司不会有两套质量标准，除非是客户定制化项目指定物料，才会进行供应商限定

依科赛有单独的物料体系标准，按照口服制剂的微限要求<100cfu标准进行物料筛选，并且需要物料供应商签署质量保证协议。

组合的测试更多的是加入DoE分析，能够知道细胞株对于组分的偏好，后期降低成本也有优势。

配液及使用方案请见产品手册。搅拌时间是在我们QC小量和工艺较大体积多批次配制后定下的经验值，如果水温低，需要适当增加搅拌时间。我们工艺配制50L或100L+培养基时， （1）向水中缓慢加入粉末，尽量避免结团，搅拌20min; （2）添加NaHCO₃, 再搅拌20min; （3）调酸碱/定容/添加NaCl的操作，每个操作后搅拌5~10 min

我们渗透压的计算：每添加1g/L NaCL 约增加31.5 mOsm/kg

确定不含