正常培养中（或稳转293细胞系的补料批培养），培养D3/D5/D7分别添加培养体积5%比例HA01补料，也就是隔天加。若是应用于瞬转蛋白的表达，需要转染后16-24h后添加补料。补料成分主要就是一些氨基酸、葡萄糖和微量元素。

031c主要是适用于293稳转细胞株的体系，添加方案是5%，持续补料，不容易出现渗透压过高的情况。041c主要是适用于瞬转的体系，用于扩增病毒或者蛋白，转染后24h补料一次，补料比例为工作体积的5%，在后续培养过程中需要保持残糖浓度在20 mM左右。

稳转培养由于一直加补料，需要重点关注渗透压的情况，以及里面的糖分需要监测，一般控制在6g/L。谷氨酰胺需要每周测一次。

血糖仪的误差比较大，研发人员之前用标准液测过一次，比实际的值低三分之一。客户可以一直用血糖仪进行监测，根据初始的糖量，后续补糖控制在初始的量的范围亦可（比如一开始血糖仪测的是4g/L，那么后续就控制在用血糖仪测的都是4g/L即可）。

根据不同蛋白的具体情况来看，可能隔天收，可能最终收。要看蛋白是不是容易降解的蛋白，如果是容易降解的蛋白就需要及时收取。如果像IgG这种不容易降解的蛋白，一般就是最后收。要注意蛋白产量高上去之后生成和降解的动态平衡。

293细胞做瞬转蛋白表达，5-7天后一般可以得到100mg-1000mg/L。CHO细胞长期用于稳转蛋白表达，有的可以做到10g/L，开发的工艺和相关的培养基开发都比较成熟，所以表达量都要比293高。

我们这里一般是用HPLC过Protein A 柱子来检测，或者用R8蛋白质分析系统通过检测结合速率来确定蛋白产量。客户如果用BCA来测也可以，需要注意去除死亡的宿主蛋白。样品的处理方法为10000rpm离心5min后，用0.22μm过滤后，如果是BCA方法需要提前纯化去除杂蛋白再检测。这三种方法因为我们这里没有标准品，不好说哪个更准。

不会，293细胞属于永生细胞系，可以一直传代，一般在20-30代以内没有太大问题。

明确是不含有细胞周期阻断成分的，比如丁酸钠，VPA（丙戊酸钠）之类的

不可以培养贴壁的293细胞，只能进行无血清悬浮驯化成悬浮293细胞，贴壁293 的病毒生产可以推进病毒生产无血清培养基（换液培养基），降低下游纯化压力