1）培养基保存，尽量减少培养基与空气接触，若开瓶后的培养基短时间内不能能用完，可以按试验安排进行分装 2）细胞需要提前一天以稀释的方式接种，培养24h后进行转染 3）转染前不可对细胞进行离心换液，也尽量避免新鲜培养基的加入

-40°保存最好，-20°也可以。

冻存液产品推荐用依科赛品牌的UC04无血清细胞冻存液，若客户自己配冻存液，推荐用10%的DMSO和20%的血清，如果不加血清会较大影响细胞冻存效果，冻存密度可控制在1E7 cells/管。

起始接种密度推荐0.6E6 cells/mL，培养三天后密度可达4E6-5E6 cells/mL，需要进行传代操作；若起始密度为1E6 cells/mL，则两天可达到4E6-5E6 cells/mL。

正常培养中（或稳转293细胞系的补料批培养），培养D3/D5/D7分别添加培养体积5%比例HA01补料，也就是隔天加。若是应用于瞬转蛋白的表达，需要转染后16-24h后添加补料。补料成分主要就是一些氨基酸、葡萄糖和微量元素。

031c主要是适用于293稳转细胞株的体系，添加方案是5%，持续补料，不容易出现渗透压过高的情况。041c主要是适用于瞬转的体系，用于扩增病毒或者蛋白，转染后24h补料一次，补料比例为工作体积的5%，在后续培养过程中需要保持残糖浓度在20 mM左右。

稳转培养由于一直加补料，需要重点关注渗透压的情况，以及里面的糖分需要监测，一般控制在6g/L。谷氨酰胺需要每周测一次。

血糖仪的误差比较大，研发人员之前用标准液测过一次，比实际的值低三分之一。客户可以一直用血糖仪进行监测，根据初始的糖量，后续补糖控制在初始的量的范围亦可（比如一开始血糖仪测的是4g/L，那么后续就控制在用血糖仪测的都是4g/L即可）。

根据不同蛋白的具体情况来看，可能隔天收，可能最终收。要看蛋白是不是容易降解的蛋白，如果是容易降解的蛋白就需要及时收取。如果像IgG这种不容易降解的蛋白，一般就是最后收。要注意蛋白产量高上去之后生成和降解的动态平衡。

293细胞做瞬转蛋白表达，5-7天后一般可以得到100mg-1000mg/L。CHO细胞长期用于稳转蛋白表达，有的可以做到10g/L，开发的工艺和相关的培养基开发都比较成熟，所以表达量都要比293高。