推荐以8000cells/cm²密度接种,72h后收获细胞,此操作不需要换液,可节省培养基使用,节省成本;若以低密度4000cells/cm²接种,96h后收获细胞,可考虑在72h时半量换液。
间充质干细胞生长过密时,会出现接触抑制,引起细胞活性下降,后续传代细胞生长缓慢,细胞收获量减少,传代次数减少,且此过程不可逆。
培养基内含有多种蛋白,包括纤维蛋白,在冻融或配液过程中有少量析出,因此有时会观察到有少量颗粒物,不影响产品质量,可离心或过滤后直接使用。
添加组分溶解后,进行吸吹混匀,静置1min,可避免或减少蛋白析出。
细胞可传代次受起始细胞状态影响较大,使用本产品分离的脐带MSC细胞,可连续传代至P20代;可支持脂肪MSC及骨髓MSC(测试细胞为ATCC来源)连续传代至P15代以上。
含有人血白蛋白,为确保材料安全性,所使用的原材料为临床级产品,是国家批准的可用于临床诊断的产品,有明确的来源、批号及质量报告,经过艾滋病病毒(HIV-1/2)抗体、乙肝表面抗原(HBsAg)抗体和丙肝病毒(HCV)检测,检测结果为阴性。
细胞在超低温状态下生理活动基本处于静止状态,复苏后细胞恢复活性需要一个过程,因此复苏细胞首次传代时间延长。
温和消化酶是重组蛋白酶,不含有动物源成分,作用更温和,消化时间稍长一些,消化MSC细胞37℃环境下,通常需要2-6min。
不可以。残留的消化酶会影响传代后的细胞贴壁,进而影响细胞增殖;消化后加入等体积培养基稀释消化液,再离心收集细胞;离心去除消化液再用PBS清洗细胞效果更佳;尤其是原代培养中首次传代时(P0 到 P1)
不需要。建议复苏细胞直接使用依科赛产品,尽量避免体系转换。