ResiQuant®支原体检测试剂盒（荧光探针qPCR法）与ResiQuant®支原体DNA提取纯化试剂盒（磁珠法）（CAT. CRB00-0031/CRB00-0032）配套使用，定性检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批以及细胞制品中是否有支原体的污染。 本试剂盒采用荧光探针qPCR技术，在支原体保守基因片段设计引物探针，依据序列比对结果可定性检测约174种支原体。检测特异性强，与支原体亲缘关系较近的细菌（乳酸杆菌、梭菌、链球菌等）和常见工程细胞如CHO、VERO、HEK293等无检出；根据EP 2.6.7、JP XVIII和USP <77>支原体检测相关要求进行验证，检测限可达10 CFU/mL，符合EP 2.6.7对于NAT方法替代培养法的检测灵敏性要求。 本试剂盒引入尿嘧啶-N-糖基化酶（uracil-N-glycosylase，UNG）防污染系统，可有效去除PCR产物的残留污染，避免由扩增产物污染而导致的假阳性。本试剂盒采用FAM+HEX/VIC双通道检测方法，且包含PC（阳性对照）和RC（回收控制），用于监测检测灵敏度及样本回收情况，避免假阴性。试剂组分中含有参比染料ROX，适用于ABI荧光定量PCR仪或其他同类设备，起到荧光参比光程校正的作用。 首次使用建议先进行样本适用性研究，包括基质干扰、检测限及专属性。低水平污染样本（≤10 CFU/mL）中支原体核酸含量不符合正态分布，本试剂盒采用3复孔报告方式，置信度在90%以上。 产品特点 1.灵敏度高：检测限10CFU/mL；和培养法平行比对验证，灵敏度等效或优于培养法 2.覆盖范围广：可检测约174种支原体 3.假阳性控制：采用touch down 的qPCR技术，减少非特异性扩增降低背景干，引入UNG防污染系统，降低扩增产物导致的污染；有效避免假阳性 4.假阴性控制：采用双通道检测方法，包含PC（阳性对照）和RC（回收控制），监控样本回收和基质干扰情况，避免假阴性 5.产品合规：按照欧洲药典EP 2.6.7和日本药典JP G3验证，符合法规要求
验证项目 合格标准 结果 检测限 10 CFU/mL支原体加标CHO细胞样本24次检测中阳性数量≥23次 合格 专属性 9种病原菌+4种细胞基因组DNA检测无检出 合格 检测范围 柔膜菌纲物种 174种 冻融稳定性 检测试剂盒15次冻融10 CFU/mL支原体加标样本可检出 合格 仪器适用性 ABI7500/伯乐CFX96仪器对 10 CFU/mL支原体加标样本可检出 合格 干扰性 CHO/293细胞/T细胞样本（5×106）; 细胞培养上清；血清样本；血清培养基 样本；细胞冻存液10 CFU/mL支原体加标样本可检出 合格 药典培养法平行验证 与药典培养法检测水平相当 合格
