血清解冻后可能出现肉眼可见絮状沉淀物,属正常现象,不影响血清质量。发生沉淀的主要原因是血清中白蛋白和脂蛋白在溶解过程中出现微量蛋白变性而引起沉淀聚集析出;作为凝血蛋白之一的血纤维蛋白在血清解冻后也会存在于血清中,也是造成血清沉淀的因素之一。按照推荐方法解冻可以有效减少沉淀产生。对于絮状沉淀物如必须处理,请于500×g离心5-10 min,取上清即可正常使用;不处理直接使用也不会影响血清效果。
血清到货后请检查内外包装,确认没有问题后请正置存放于-20 ℃的非自动除霜恒温冰箱中。无论是整瓶还是分装后的血清,解冻后请勿长时间放置在室温或2-8 ℃环境中,以免造成血清质量下降。
血清到货后请检查内外包装,确认没有问题后请正置存放于-20 ℃的非自动除霜恒温冰箱中。无论是整瓶还是分装后的血清,解冻后请勿长时间放置在室温或2-8 ℃环境中,以免造成血清质量下降。
①走私血清缺乏检验检疫监管,冷链运输无法保障,严重影响血清批内和批间稳定性,实验数据结果不可控;
②正规的血清来源于中华人民共和国海关总署允许进口的非疫区国家,而很多走私的血清往往来自发生过疫情的国家。未经检疫的血液制品中可能携带传染性物质,一旦流入境内,可能会对试者和研究人员的生命健康造成威胁。
FBS中的絮状物可能由很多种原因造成,其中最常见的沉淀主要成分是纤维蛋白和脂蛋白,不会影响血清品质,沉淀若需去除,视沉淀大小500-1000×g,离心5-10min去除,也可不做处理。
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否浑浊,然后在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变浑浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:①细胞生长过老,破碎的细胞残骸;②配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;③培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除;④血清等级不足以维持细胞良好的生长。
请先确认细胞培养实验方案是否需要对血清进行热灭活。一般不建议热灭活,热灭活处理会损失血清中部分营养成分,并且容易发生蛋白质聚集沉淀;少数对补体敏感的实验需要(如某些免疫学实验,腺病毒包装,某些PS培养等),可酌情使用热灭活血清。热灭活方法:血清完全解冻充分摇匀后置于56℃水浴中30min,期间不时晃动均匀。
实验显示,热灭活对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清,会增加沉淀产生的概率,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染。热灭活过程中局部温度过高,摇晃不均匀,灭活时间过长,都会造成血清品质下降。若非必须,可以不需要做热灭活这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
血清中含有微量的血红蛋白,与采集血液过程中血细胞的破裂数目有关,只要血红蛋白的含量在药典规定范围内,颜色的深浅和血清品质无关,不影响细胞培养。中国药典规定血红蛋白含量≤200mg/L。
所有的ExCell Bio血清都在冰冻状态下由干冰运输,因此您收到时应该仍是冰冻状态。如果只是部分解冻,FBS仍然可以使用,但是建议先将FBS在冰箱中充分解冻,之后温和的摇晃摇匀,再移至-10℃及以下进行储存。