转速25-28rpm，角度6-8，空气恒通500ccm，二氧化碳0-10%浮动，根据pCO2值调整，氧气根据pO2调整

补料与补糖同天，则将体系内葡萄糖上限浓度提升至8g/L，不同天则控制上限为6g/L； 补料比例属于工艺参数里的补料策略内容，精细化做的话需要自己摸索，不过我们给到客户的添加比例也是可以直接先拿来用，不合适再修改。 血糖仪测量葡萄糖，精度稍差，即准确性可能稍差，但是在检测下限方面还是可以发挥作用。

1.摇管上的高密度接种工艺，2.从稳定细胞池中筛选出一个单克隆，不需要做克隆源性以及稳定性，所以可以做的比较快，比较快的拿到细胞株

确认补料比例稍低，且摇床的转速不够导致的；乳酸太高导致渗透压到了480mOsm/kg附近，高渗透压导致了细胞直径变大 CHO细胞本身正常状态下活率应该在99%以上，90%活率虽然看着很高，但是已经不是细胞的正常状态了，Fed-Batch后期活率骤降是很正常的。

乳酸产生有3个： 1. 细胞株本身乳酸代谢异常，可以通过更换宿主细胞株或者提高筛选克隆通量，且在克隆筛选时将代谢参数也纳入筛选标准； 2. Fed-batch时葡萄糖浓度维持在高水平，8-10g/L以上，建议采用低糖工艺，可以每天补料补糖，降低糖的上限浓度； 3. 细胞株消耗氧能力高，因此摇瓶摇管无法提供足够的溶氧，可以提高摇床转速或者使用反应器。

1.乳酸累积导致的pH下降；2.补料补糖不足；3.瞬转试剂对于细胞有损伤

不能一概而论，酸峰来源的修饰不同。补料影响氧化还原环境，进而影响酸碱峰，大部分可以通过调节补料来调节；但基础培养基提供大环境，比如C端Lys切除导致的酸峰，调节基础更好；基础与补料交互影响。

温度和光照对培养基补料颜色影响较大，我们做过性能稳定性考察，避光室温放置9d、13d或未避光均出现不同程度颜色变化，但是细胞活率及蛋白产量没有显著性差异

不需要，稳转项目可以使用线性化，瞬转项目中质粒是否线性化，超螺旋比例不影响最后表达结果

从高表达类型来看，293优于CHO，从低表达类型来看，CHO的长期活率维持以及密度都会更高，会有部分优势，某些难以表达的抗原，可以采用其他表达体系。